Please use this identifier to cite or link to this item: https://bdigital.uniquindio.edu.co/handle/001/4191
Title: Identificación De Sustratos Proteicos En Celulas Humanas Para Proteinas Rop Cinasas De Toxoplasma Gondii
Authors: Arenas Soto Ailan Farid
Jorge Enrique Gómez Marín - Director de tesis
Issue Date: Sep-2017
Abstract: RESUMEN Introducción: Toxoplasma secreta unas proteínas conocidas como ROP cinasas; (ROPs) las cuales son importantes para establecer la supervivencia y el crecimiento del parásito en el interior de la célula hospedera. Se ha evidenciado que el complejo ROP5/ROP18 secretado por Toxoplasma, es el mayor efector relacionado con virulencia en ratones; este complejo fosforila específicamente proteínas GTPasas inducidas por interferón (IRGs). No hay evidencia si este complejo u otras ROP cinasas están implicadas en el desarrollo de la toxoplasmosis humana. Objetivo: Evidenciar sustratos humanos para las proteínas cinasas ROP11, ROP39 ROP5 y ROP18 de Toxoplasma gondii en una línea celular humana. Metodología 1a: diseñamos un algoritmo llamado MSCA (Multiple Spectral Comparison Alignment) para la búsqueda de interacciones entre proteínas (Toxoplasma y Humano). 2a: las proteínas recombinantes ROP11, ROP39, y GBP5 se clonaron en pGEX4T1 y se expresaron en E. coli ROSSETTA DE3; con estas proteínas se realizaron ensayos de Pull-down Mass spectrometry (MS) y Pull-down Western blot (WB). 2b: utilizando el sistema de 2 híbridos en levadura (Y2H) realizamos ensayos de interacción proteína-proteína entre ROPs y GBPs humanas (Guanylate binding proteins). 2c: nosotros comparamos los niveles de pro-IL1β en PBMCs humanos infectados ex-vivo con Toxoplasma cepa RH o RHΔROP18. Resultados 1ª: MSCA propone las interacciones ROP11-SLC3A2, ROP11-ANXA6, ROP39-SHMT2, ROP39-ROP5, hGBP5-ROP5 y hGBP5-ROP18-. 2a: las interacciones ROP11-SLC3A2, ROP11-ANXA6, ROP39-SHMT2 y ROP39-ROP5 fueron confirmadas por Pull-down MS. 2b: observamos las interacciones hGBP5-ROP18 y hGBP5-ROP5- por Y2H. Se confirmaron las interacciones ROP39-ROP5 y ROP5-GBP5 por Pull-down-WB. 2c: Observamos mayor cantidad de pro-IL1β en PBMCs infectadas con RHΔROP18. Conclusiones: las interacciones ROP39-ROP5 y hGBP5-ROP5 fueron confirmadas por 2 técnicas diferentes. Sugerimos que ROP5 interacciona con GBP5 humana y esta interacción podría alterar la activación del inflamosoma dependiente de ROP18 en PBMCs humanos.
URI: https://bdigital.uniquindio.edu.co/handle/001/4191
Appears in Collections:FDA. Monografías, Tesis y Trabajos de Grado

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Licencia Ailan Farid.pdf1.91 MBAdobe PDFView/Open    Request a copy
TESIS AILAN FARID ARENAS.pdf2.61 MBAdobe PDFView/Open    Request a copy


This item is protected by original copyright



Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.