FDA. Monografías, Tesis y Trabajos de Grado

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Identificación in silico, perfil de expresión y búsqueda de inhibidores de la familia de proteínas disulfuro isomerasa de Toxoplasma gondii

Moncada Giraldo, Diego Mauricio | 2018-06-25

Identificación in silico, perfil de expresión y búsqueda de inhibidores de la familia de proteínas disulfuro isomerasa de Toxoplasma gondii Con un tercio de la población mundial infectada por Toxoplasma gondii, las infecciones oportunistas causadas por este parásito son una causa frecuente de complicaciones clínicas en personas inmunocomprometidas. Actualmente los tratamientos se enfocan en infecciones agudas, pero no son efectivos contra las demás etapas del ciclo de vida del parásito. Para identificar nuevos blancos farmacológicos, se realizó una comparación de niveles de expresión génica de múltiples etapas durante del ciclo de vida del parásito y se identificaron ortólogos en las especies de coccidios, Neospora caninum, Sarcocystis neurona, Hammondia hammondi y Eimeria tenella. Se identificaron 23 proteínas en el transcriptoma de T. gondii ME49, 23 con sintenia en N. caninum, S. neurona, H. hammondi y 3 en E. tenella. Estas proteínas contienen al menos un dominio de tiorredoxina, que es característico de la familia de proteínas disulfuro isomerasa (PDI), con frecuencias variables de dominios de tiorredoxina y diferentes arquitecturas que se comparten entre estos parásitos. Se describen los perfiles de expresión de proteínas estadio especifico durante los estadios taquizoito, bradizoito y de ooquistes y los de proteínas multi-estadio. Se propone a la proteína codificada por la secuencia genómica TGME49_211680 como un blanco farmacológico dado que tiene expresión multi-estadio y es la proteína con más expresión en las cepas arquetípicas durante la infección tanto de células humanas como de ratones en estadios crónicos y agudos y por tener evidencia de ser esencial para el estadio taquizoito. Encontramos en ensayos de invasión en fibroblastos de prepucio humano con bacitracina, un inhibidor conocido para proteínas PDI, reducción de los porcentajes de invasión de los taquizoitos. Estos resultados sugieren que la familia PDI tiene un papel en la invasión de taquizoitos y podría ser un blanco para nuevas intervenciones terapéuticas. Además, debido a la alta conservación de las 3 secuencias de esta familia de proteínas entre los coccidios, la familia PDI podría ser un blanco farmacológico importante para estos parásitos.

Efecto del ejercicio físico en la concentración de MMP, subfracciones de HDL2, HDL3 y APOA-I, en personas hipertensas, en la ciudad de Armenia – Quindío

Nieto Cárdenas, Olga Alicia | 2013-06

RESUMEN El objetivo del presente trabajo fue determinar la relación del ejercicio físico con los niveles séricos de la MMP2 y MMP9 y las subfracciones de HDL, en personas hipertensas de la Ciudad de Armenia - Quindío - Colombia. Se llevó a cabo un estudio cuasi experimental tipo ensayo comunitario, donde la intervención fueron dos meses de ejercicio físico. Los resultados fueron: Se captaron 160 pacientes de los cuales 125 permanecieron hasta el final del proyecto, es decir, hubo un 78,12% de permanencia; el 28% (35 pacientes) hicieron ejercicio físico. El análisis estadístico mostró una reducción altamente significativa de la tensión arterial sistólica y diastólica en personas que hicieron y no hicieron ejercicio. Las cifras de HDL aumentaron con el ejercicio pero se mantuvieron por debajo de lo normal antes y después del mismo, con niveles normales de apoA-I, la cual aumentó con el ejercicio; las HDL2 aumentaron mientras las HDL3 descendieron significativamente; la MMP2 subió y la MMP9 bajó, ambas significativamente. El análisis de regresión múltiple mostró que el ejercicio establece una red de relaciones entre variables bioquímicas y fisiológicas que antes estaban independientes. Y el análisis de regresión logística evidenció que el tiempo de ejercicio afecta significativamente la disminución de la TAS, el aumento de la MMP2 y la disminución de la MMP9. El análisis estructural mostró que la variable de mayor poder fue la MMP2, la cual influencia las relaciones establecidas sobre la HDL2, HDL3 y la tensión arterial diastólica.

Identificación de sustratos proteicos en celulas humanas para proteínas ROP cinasas de Toxoplasma gondii

Arenas Soto, Ailan Farid | 2017-09

Summary Background: Toxoplasma secretes proteins known as ROP kinases; (ROPs) which are important for establishing the survival and growth of the parasite within the host cell. It has been shown that the Toxoplasma ROP5/ROP18 complex is the major effector related to virulence in mice. This complex specifically phosphorylates interferon-induced GTPases (IRGs). There is no evidence whether this complex or other ROP kinases are involved in the development of human toxoplasmosis. Aim: To search human substrates for Toxoplasma gondii ROP11, ROP39 ROP5 and ROP18 in a human cell line. Methodology 1a: We designed an algorithm called MSCA (Multiple Spectral Comparison Alignment) for the search of interactions between proteins (Toxoplasma and Human). 2a: recombinant proteins ROP11, ROP39, and GBP5 were cloned into pGEX4T1 and expressed in E. coli ROSSETTA DE3; with these proteins we performed Pull-down assays either with mass spectrometry (MS) or Western blot (WB). 2b: yeast 2 hybrids (Y2H) protein-protein interaction screening was performed between some ROPs and human GBPs 1-5. 2c: pro-IL1β levels were compared in human PBMCs infected ex-vivo with Toxoplasmas RH or RHΔROP18. Results 1a: MSCA proposed the interactions ROP11-SLC3A2, ROP11-ANXA6, ROP39-SHMT2, ROP39-ROP5, hGBP5-ROP5, and hGBP5-ROP18. 2a the interactions ROP11-SLC3A2, ROP11-ANXA6, ROP39-SHMT2, and ROP39-ROP5 were confirmed by Pull-down MS. 2b: the interactions hGBP5-ROP18 and hGBP5-ROP5 were observed in the yeast 2 hibrid (Y2H) screening interaction. The interactions ROP39-ROP5 and hGBP5-ROP5 were confirmed by Pull-down-WB. 2c: we observed a greater amount of pro-IL1β in human cells infected with RHΔROP18 than RH. Conclusions: ROP39-ROP5 and hGBP5-ROP5 interactions were confirmed by two different techniques. We model that ROP5 interacts with human GBP5 and this interaction could alter the activation of the NLRP3-inflamosome in human PBMCs in a ROP18-dependent manner.

Evaluación de efecto de la curcumina en la infección por virus dengue en un modelo celular in vitro

Padilla Sanabria, Leonardo | 2013-11

La curcumina es una sustancia de color amarillo (diferuloymethano) que se extrae a partir de los rizomas de la Cúrcuma longa1,2, la cual se ha utilizado tradicionalmente en la cultura oriental para el tratamiento de muchas enfermedades; actualmente se han publicado resultados de varias investigaciones donde se evidencia su actividad antitumoral, inmunomoduladora, antioxidante, antiinflamatoria, antifúngica y antiviral entre otras3-8. Respecto a la actividad antiviral, se ha observado que los extractos de cúrcuma y la curcumina posee capacidad de alterar la infección de diferentes virus entre los que se encuentran: Epstein Barr, HIV, Coxsackie, hepatitas B, encefalitis japonesa, influenza entre otros.

Identificación de peptidos inmunogenicos de Toxoplasma gondii: Selección por ensayos ex vivo en muestras humanas HLA-A*02

Cardona Pérez, Nestor Iván | 2015-05-30

It is known that CD8+ T cells are the subpopulation that plays an important role in the protective immunity against Toxoplasma gondii. The use of synthetic peptides from constitutive proteins or with an immunogenic potential as vaccine candidates are used to elicit a cytotoxic response. The immune response to peptides from proteins P30 and ROP18 of Toxoplasma in human lymphocytes with or without toxoplasmosis was analyzed. Population and proliferation of lymphocytes was determined by flow cytometry and levels of cytokines IL10 and IFN-γ in culture supernatant of lymphocytes was measured by ELISA. It was found that peptides from P30 and ROP18 are immunogenic and induce proliferation mainly on CD4+ over CD8+ and elicit production of IL10 over IFN-γ. Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from HLA-A*02 individuals seropositive and seronegative for Toxoplasma were isolated to test if new peptides predicted by bioinformatics with high affinity for HLA-A*02 are recognized in the context of an infection by Toxoplasma. The immune response is lower when induced with P30 and ROP18 peptides than with GRA3 peptides. A new search for epitopes using bioinformatics tools allowed identifying a new set of peptides from which 4 (Got1, Ter1p, LMBR, PLA2) showed a good stimulation of IFN-γ in human HLA-A*02 PBMCs from Toxoplasma seropositive but not from seronegative individuals measured by ELISpot. A new rational methodology based on bioinformatics tools for Toxoplasma vaccine candidates is presented.