Estudio in Silico y Experimental de la Proteína SAG-Related Sequence 12B (SRS12B) de Toxoplasma gondii
Trabajo de grado - Pregrado
2018
Universidad del Quindío
Las proteínas SRS (Sag-related sequence) de Toxoplasma gondii
son de interés porque median la adhesión del parásito a la célula hospedadora
y, además, modulan la respuesta inmune dentro del hospedador; SRS12B es una
SRS identificada in silico por medio del software ApiPredictorAd UniQE 2.0
como posible adhesina del parásito, sin embargo, hasta el momento no se cuenta
con una descripción estructural ni funcional y su rol biológico no se ha
demostrado experimentalmente , por lo tanto, en este trabajo se buscó realizar
una descripción in silico de la estructura de la proteína SRS12B de T. gondii y
evaluar las condiciones de expresión in vitro en el modelo Escherichia coli
BL21 DE3, como primer paso para la comprensión de la funcionalidad
biológica de la proteína. Se encontró que SRS12B consta de dos dominios SAG típicos a ambos extremos, presentando una topología en tipo mancuerna
característico de otros miembros de la familia. En cuanto a su estructura
secundaria está compuesta por 21 láminas beta paralelas y antiparalelas
formando una estructura tipo β-Sandwich estabilizadas por la unión por puentes
disulfuro. SRS12B es una proteína homodimérica, el interfaz de los dominios
D1 muestran una ranura definida para la interacción con el ligando. El
acoplamiento molecular realizado con la molécula heparina presento una
energía libre de interacción de -12.5 Kcal/mol. En cuanto a la fase
experimental, se logró clonar con éxito el plásmido pEXP5-CT/TOPO con la
región codificante para SRS12B en E. coli One Shot TOP10 y posteriormente
en E. coli BL21 DE3, donde se estandarizaron las condiciones de expresión de
la proteína recombinante encontrando una producción optima de la proteína a
OD600: 0,3, 1mM IPTG y 37°C. En este estudio se presentan los primeros datos
bioinformáticos y experimentales relacionados con SRS12B.
Descripción:
Pdf. Trabajo de grado Estudio in silico y Experimental de la Proteína SAG-Related Sequence 12B (SRS12B) de Toxoplasma gondii
Título: Article_srs12b_5V.pdf
Tamaño: 1.022Mb
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