Obtención y caracterización de un anticuerpo monoclonal de ratón dirigido contra productos de excreción secreción (PE.S) de fasciola SP.

Abstract

En este trabajo se desarrolló y caracterizó un Anticuerpo Monoclonal especifico contra productos de Excreción /Secreción (PE/S) de Fasciola sp., denominado AcM E1B2D1 proveniente de la línea celular secretora del mismo nombre; para su obtención se empleó la técnica clásica de fusión celular (con el agente fundente Polietilenglicol PEG Hybri-Max, 50%(p/v) wt 1450) entre mieloma murino SP2/0-Ag14 y células esplénicas provenientes de ratones Mus musculus cepa BALB/C hembras de 2 meses de edad, inmunizadas con el esquema descrito por Gavilondo 1995, consistente 4 inoculaciones intraperitoneales de 100uL, 2 con adyuvante completo de Freund y 2 con adyuvante incompleto de Freund mas los PE/S de Fasciola sp., en relación 1:1; las inmunizaciones se realizaron cada 7 días, con un refuerzo final de amplificación administrado por vía endovenosa, con solución salina más PE/S relación 1:1. Se evaluó la estabilidad de la línea secretora E1B2D1 en cultivo celular y pases de la misma en ratonas Mus musculus cepa BALB/C. El AcM E1B2D1 fue obtenido a partir de líquido ascítico purificado por cromatografía de desalado y de afinidad con proteína G sefarosa (SIGMA, Aldrich), empleando el tampón de ácido cítrico 100mM pH 3,0. Una vez purificado se determinó el isotipo del AcM E1B2D1 encontrando que corresponde a una IgG2a, IgG2b e IgG3 cadena kappa. Posteriormente se evaluó la capacidad de reconocimiento del AcM E1B2D1 por medio de técnicas inmunoenzimáticas ELISA e Inmunoblot. La línea hibrida secretora E1B2D1 se encuentra depositada en el banco de células del grupo de inmunología Molecular GYMOL, del Centro de Investigaciones Biomédicas de la Universidad del Quindío.