Producción de Anticuerpos Policlonales IgG contra una Proteína con Actividad Oxido Nítrico Sintetasa de Toxoplasma gondii recombinante (NOS-Tg-r) e Inmunomarcaje en Taquizoitos

Abstract

La oxido nítrico sintetasa NOS es una enzima bien descrita en mamíferos, en los últimos años se ha estudiado en protozoos pero aún se desconoce aspectos importantes de su función en estos organismos. En este trabajo se logró producir anticuerpos policlonales con la proteína recombinante con actividad Oxido Nítrico Sintetasa (NOS-Tg-r) de Toxoplasma gondii e inmunomarcar sus taquizoítos. Se utilizó como modelo animal conejos Nueva Zelanda (Oryctolagus cuniculus), dos como objeto de estudio (conejo 1 y conejo 2), cuatro como control negativo (conejo 3 al conejo 6). Se inmunizó por vía intramuscular con la proteína NOS-Tg-r, y dos tipos de adyuvantes: hidróxido de aluminio y adyuvante de Freund (completo e incompleto), se realizaron cuatro inoculaciones a cada uno, conejo 1 con hidróxido de aluminio y conejo 2 con adyuvante de Freund. Se comprobó la presencia de anticuerpos policlonales en diferentes diluciones del suero (1:20, 1:50 y 1:100) por medio de la técnica de Ensayo Inmunoenzimático (ELISA) indirecto, el suero pre-inmune de los seis conejos fue el control negativo. Los resultados de las absorbancias obtenidas a 410 nm mostraron que la inoculación de la proteína NOS-Tg-r con Adyuvante de Freund tuvo mayor respuesta inmune que el de la NOS-Tg-r con hidróxido de aluminio y la dilución óptima del suero fue de 1:20 (p £0.005). Para verificar la reacción cruzada con los adyuvantes o con otras proteínas recombinantes o no, se realizó una ELISA indirecta usando como antígeno: metaloproteasa de T. gondii recombinante, cisteína proteasa 5 de Entamoeba histolytica recombinante (EhCP5r), albúmina al 2%, hidróxido de aluminio y adyuvante de Freund, como anticuerpos primarios los sueros preinmunes y el suero obtenido en la octava semana post inoculación.